تست سمیت سلولی چیست و چرا در ارزیابی زیست‌سازگاری مهم است؟

تست سمیت سلولی (Cytotoxicity) از انواع آزمون زیست سازگاری است که نشان می‌دهد آیا یک تجهیزات پزشکی یا مواد سازنده آنها می‌تواند به سلول‌های پستانداران آسیب بزند یا نه. این آزمون معمولاً یکی از اولین نقاط کنترل در مسیر زیست‌سازگاری تجهیزات پزشکی است، چون سریع‌تر از بسیاری آزمون‌های دیگر می‌تواند نشانه‌های واضحی از ریسک شیمیایی یا فرایندی (مثل افزودنی‌ها، باقی‌مانده‌های تولیدشده یا اثرات استریلیزاسیون) ارائه دهد. چارچوب تست سمیت سلولی در ISO 10993-5 تعریف شده است

 

تست  سمیت سلولی به روش MTT چیست؟

تست سمیت سلولی به روش MTT یعنی ارزیابیِ سمیت سلولی (cytotoxicity) یک ماده یا تجهیز پزشکی با استفاده از آزمون رنگ‌سنجی MTT؛ روشی که زنده‌مانی و فعالیت متابولیک سلول‌ها را به‌طور غیرمستقیم می‌سنجد. در این روش، سلول‌های زنده رنگ زرد MTT را به یک محصول بنفش به نام فرمازان (formazan) تبدیل می‌کنند؛ هرچه رنگ بنفش کمتر شود، یعنی تعداد یا فعالیت سلول‌های زنده کمتر شده و احتمال سمیت بالاتر است.

 

تست‌های سمیت سلولی در شرایط آزمایشگاهی برای تعیین سمیت ماده بر روی سلول‌های پستانداران، به‌طور مستقیم یا از طریق انتشار، با عصاره‌های این ماده، بسته به دوز و زمان قرار گرفتن در معرض ماده مورد بررسی، استفاده می‌شوند. این سیستم های آزمایشی؛ مشاهده مورفولوژیکی آسیب سلولی، تعیین آسیب سلولی با روش های مختلف اندازه گیری، تعیین رشد سلولی، تعیین هرگونه تغییر در متابولیسم سلولی.

و

برای کسب اطلاعات بیشتر و دریافت خدمات با ما تماس بگیرید.

انواع روش های تعیین سمیت سلولی

انواع تست سمیت سلولی را می‌شود از دو زاویه دسته‌بندی کرد:
۱)روش تماس نمونه با سلول (طبق ISO 10993-5) و  ۲) روش اندازه‌گیری زنده‌مانی یا آسیب.

۱)تعیین سمیت سلول بر اساس روش تماس

تست سمیت سلولی به روش تماس غیرمستقیم:

تماس غیرمستقیم/انتشاری یعنی نمونه روی سلول‌ها نمی‌نشیند؛ بین نمونه و سلول یک واسطه مثل فیلتر یا لایه آگار قرار می‌دهند تا اثر نمونه از طریق انتشار منتقل شود و خطای مکانیکی تماس مستقیم کمتر شود. در این آزمایش، یک لایه آگار بر روی سلول های فیبروبلاست L929 رشد کرده در ظروف کشت سلولی تشکیل می شود. موادی که از دستگاه پزشکی که مستقیماً روی آگار قرار داده می شود یا از واحد آزمایش آغشته به عصاره دستگاه پزشکی نشت می کند از لایه آگار عبور می کند و به سلول ها می رسد و ممکن است اثرات کشنده ای از خود نشان دهد. این اثرات به صورت نیمه کمی ارزیابی می شوند.

تست سمیت سلولی به روش استخراج:

آزمون عصاره/استخراج هم یعنی ابتدا نمونه را در یک محیط مناسب استخراج می‌کنند تا مواد قابل حل/قابل انتقال وارد عصاره شود، سپس همین عصاره روی سلول‌ها اعمال می‌شود و عملاً اثر مواد قابل استخراج سنجیده می‌شود. 

در کنار ارزیابی کیفی، برای ارزیابی کمی از آزمون‌های سنجش زنده‌مانی استفاده می‌شود؛ مثل MTT، XTT، WST-1 (روش‌های تترازولیومی) یا جذب قرمز خنثی (Neutral Red Uptake) که بسته به جنس نمونه و طراحی مطالعه انتخاب می‌شوند.

تفاوت مهم اینجاست که در MTT محصول نهایی معمولاً به شکل بلورهای نامحلول تشکیل می‌شود و برای اندازه‌گیری باید حل شود، اما در XTT محصول رنگی اغلب محلول‌تر است و خوانش آن ساده‌تر انجام می‌شود؛ به همین دلیل ممکن است آزمایشگاه بر اساس شرایط نمونه، یکی را ترجیح دهد.

2)تعیین سمیت سلول بر اساس روش اندازه گیری زنده مانی

1) ارزیابی کیفی (میکروسکوپی/مورفولوژی): تغییر شکل سلول، جدا شدن از سطح، تخریب، تغییر یکپارچگی غشاء و…
2) ارزیابی کمی (زنده‌مانی/متابولیسم/غشاء) که رایج‌ترین‌ها شامل:

• MTT / XTT / WST-1 (تترازولیوم‌ها): بر پایه فعالیت متابولیک سلول‌های زنده و تولید محصول رنگی.

• Neutral Red Uptake (NRU): سنجش جذب رنگ قرمز خنثی توسط سلول‌های زنده.

• LDH release: سنجش آسیب غشاء با اندازه‌گیری LDH آزادشده به محیط.

• Live/Dead staining (فلورسانس): تفکیک سلول‌های زنده/مرده با رنگ‌های فلورسنت.

• ATP assay: برآورد زنده‌مانی با اندازه‌گیری ATP سلولی.

 

مقالات بیشتر:

تست  چسبندگی سلولی

تست  سمیت چشمی

باقیمانده اتیلن اسکاید 

تست  خون سازگاری و هولیز کنندگی

تست های سمیت سلولی

اولین آزمایش زیست سازگاری که در محدوده ارزیابی خطر بیولوژیکی دستگاه‌های پزشکی انجام می‌شود، آزمایش‌های سمیت سلولی در استاندارد ISO 10993-5: 2010 است. آزمایش سمیت سلولی آزمایشگاهی امکان تعیین کمی و کیفی سرکوب تکثیر سلول‌هایی را که در شرایط آزمایشگاهی با دستگاه‌های پزشکی در تعامل هستند یا اثرات کشنده (سیتوتوکسیک) آنها بر سلول‌ها را تعیین می‌کند. برای این منظور، مستقیماً با دستگاه پزشکی و اثر سیتوتوکسیک که ممکن است در نتیجه برهمکنش با موادی که ممکن است از دستگاه پزشکی نشت کند یا اغلب عصاره ها (عصاره ها) به دست آمده از دستگاه پزشکی رخ دهد، استفاده می شود. با استفاده از حلال هایی که پتانسیل برخورد قطبی، آپولار یا هر دو را دارند، اثر سیتوتوکسیک با برهمکنش با سلول ها ارزیابی می شود.

تست های MTT، انتشار آگار و انتشار فیلتر که در محدوده استاندارد ISO 10993-5 پذیرفته شده است توسط پرسنل متخصص در آزمایشگاه کشت سلولی آزمایشگاه آنالیز SIA انجام می شود. کدام یک از این آزمایشات را می توان توسط مشتری و آزمایشگاه ما توصیه کرد.

آزمایش MTT برای سلول های فیبروبلاست L929 استاندارد شده در غلظت های مختلف عصاره دستگاه پزشکی به دست آمده از یک حلال قطبی، غیرقطبی یا نیمه قطبی استفاده می شود و سمیت حاصل با روش های رنگ سنجی اندازه گیری می شود.

در آزمایش انتشار فیلتر، سلول های رشد یافته روی فیلترهایی با قطر منافذ معین معکوس شده و روی آگار پوشانده می شوند. نشت مواد از دستگاه پزشکی که مستقیماً روی فیلتر اعمال می شود یا از موادی که عصاره به آن آغشته می شود از فیلتر عبور کرده و به سلول ها می رسد. یک ارزیابی نیمه کمی با اندازه گیری قطر ناحیه مناطق عاری از سلول تشکیل شده است.

بسته به ماهیت محصول، یک یا چند مورد از این آزمایش ها در صورت لزوم انجام می شود و ارزیابی سمیت سلولی دستگاه پزشکی انجام می شود.

 

آزمایشگاه‌ نیکوفارمد

در آزمایشگاه‌ نیکوفارمد، مطالعات سمیت سلولی بر روی فیبروبلاست‌های و رده‌های سلولی مختلف در صورت درخواست توسط کارشناسان ما با تصمیم‌گیری بر اساس محصول انجام می‌شود. مطالعات سمیت سلولی در محدوده تجهیزات پزشکی آزمایشی است که باید بر روی تمام محصولاتی که نیاز به آزمایش زیست سازگاری دارند انجام شود. در ابتدای آزمایش هایی است که باید در ارزیابی زیست سازگاری انجام شود. از آنجایی که این یک مرجع برای روشن کردن سایر آزمایش‌های زیست سازگاری است، قابلیت اطمینان آزمایش و نتایج بسیار مهم است. به همین دلیل، آزمایشگاه ما که دارای اعلامیه انطباق GLP است که یک گواهی کیفیت مهم است، این اطمینان را به مشتریان ارائه می دهد.

 

لطفا برای اطلاعات بیشتر با ما تماس بگیرید.

 

سوالات پرتکرار

MTT مخفف چیست ؟

MTT در تست سمیت سلولی یعنی:
3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-Diphenyltetrazolium Bromide

و از سه بخش کلیدیِ ساختار مولکول گرفته شده، نه از کل جمله:

• این مولکول یک tetrazolium دارد → حرف T

• یک گروه thiazolyl (حلقه thiazole) هم دارد → حرف T دیگر

• و یک گروه methyl هم در thiazole دارد (dimethyl) → حرف M

استاندارد مورد استفاده در تست سمیت سلولی چیست؟

 این آزمون بر اساس ISO 10993-5 انجام میگیرد و نشان می‌دهد آیا محصول یا عصاره آن، در شرایط in vitro(برون تنی) باعث آسیب قابل توجه به سلول‌های پستانداران می‌شود یا نه.

تست سمیت سلولی برای چه محصولاتی انجام میشود؟

تست سمیت سلولی (Cytotoxicity) برای محصولاتی مناسب است که مستقیم یا غیرمستقیم با بدن انسان تماس دارند و سامل موارد زیر میشوند:

• کاتترها (فولی، CVC/PICC)، ست سرم و تیوبینگ تزریق

• دستکش پزشکی، ماسک، سرنگ و قطعات الاستومری مثل پیستون/گسکت

• پانسمان‌ها و محصولات مراقبت از زخم (هیدروژل، فوم، آلژینات)

• محصولات دندانپزشکی پلیمری (کامپوزیت، سیلانت، مواد قالب‌گیری)

• ایمپلنت‌ها و مش‌های جراحی و قطعات پلیمری/پوشش‌های پلیمری روی ابزارها

 سمیت سلولی|تست سمیت سلولی