تست سمیت سلولی


آزمون سمیت سلولی چیست؟

تست سمیت سلولی آزمونی برون تنی (in - vitro) است که برای ارزیابی اثرات سمی مواد یا تجهیزات پزشکی بر سلول‌های زنده انجام می‌شود. آزمون سمیت سلولی به تشخیص مرگ سلول‌ها، مهار رشد سلولی و سایر اثرات بیولوژیکی نامطلوب کمک می‌کند.

تست سمیت سلولی برای تمامب تجهیزات و ملزومات پزشکی که کمتر از 24 ساعت،بین 24 ساعت تا سی روز و یا به طور دائمی با بدن در تماس هستند اجباری است.

تست سمیت سلولی برای ارزیابی تأثیر مواد شیمیایی، داروها، و محصولات مختلف بر سلول‌های زنده انجام می‌شود.

جهت دریافت خدمات و مشاوره رایگان تماس بگیرید.

روش های تست سمیت سلولی

روش‌های مختلفی برای انجام تست سمیت سلولی وجود دارد که هر کدام ویژگی‌ها و مزایای خاص خود را دارند. در ادامه، برخی از رایج‌ترین روش‌های تست سمیت سلولی توضیح داده شده است:



 1. MTT Assay (آزمون MTT)


این روش یکی از محبوب‌ترین تست‌های سمیت سلولی است. سلول‌های زنده می‌توانند ترکیب MTT (تترازولیوم زرد رنگ) را به فورمازان (ترکیب آبی رنگ) تبدیل کنند. مقدار فورمازان تولید شده به عنوان شاخصی از تعداد سلول‌های زنده استفاده می‌شود.


 2.LDH Assay (آزمون LDH)

این تست بر اساس اندازه‌گیری فعالیت لاکتات دهیدروژناز (LDH) آزاد شده از سلول‌های آسیب دیده یا مرده است. LDH یک آنزیم داخل سلولی است که در صورت آسیب دیدن غشاء سلولی به محیط بیرون نشت می‌کند.



 3. Trypan Blue Exclusion Test 


در این روش، سلول‌ها با رنگ تریپان بلو رنگ‌آمیزی می‌شوند. سلول‌های زنده قادر به دفع این رنگ هستند، در حالی که سلول‌های مرده رنگ را جذب می‌کنند. با شمارش سلول‌های رنگ‌آمیزی شده و نشده، می‌توان میزان سمیت سلولی را تعیین کرد.



 4. Flow Cytometry (سایتومتری جریان)


این روش از فلورسانس برای بررسی ویژگی‌های فیزیکی و شیمیایی سلول‌ها استفاده می‌کند. این تست می‌تواند برای تشخیص سلول‌های زنده و مرده و همچنین بررسی تغییرات در مورفولوژی سلولی و وضعیت غشاء سلولی به کار رود.



 5. Alamar Blue Assay


این روش بر اساس تغییر رنگ معرف Alamar Blue در حضور سلول‌های زنده است. سلول‌های زنده معرف را احیا کرده و رنگ آن را تغییر می‌دهند که این تغییر رنگ به عنوان شاخصی از تعداد سلول‌های زنده محسوب می‌شود.


6. Neutral Red Assay (آزمون رنگ خنثی)


در این تست، سلول‌های زنده رنگ خنثی را جذب کرده و در لیزوزوم‌ها انباشته می‌کنند. سلول‌های مرده این توانایی را ندارند. مقدار رنگ جذب شده به عنوان شاخصی از تعداد سلول‌های زنده استفاده می‌شود.


 7. ATP Assay


این روش مقدار ATP داخل سلولی را اندازه‌گیری می‌کند. ATP یک مولکول انرژی‌زا است که فقط در سلول‌های زنده وجود دارد، بنابراین مقدار ATP به عنوان شاخصی از تعداد سلول‌های زنده محسوب می‌شود.



 8.Caspase Assay


این تست فعالیت آنزیم‌های کاسپاز را که در فرایند آپوپتوز (مرگ برنامه‌ریزی شده سلولی) نقش دارند، اندازه‌گیری می‌کند. افزایش فعالیت کاسپازها نشان‌دهنده وقوع آپوپتوز در سلول‌هاست.



 9.Live/Dead Assay (آزمون زنده/مرده)


در این روش، از دو رنگ فلورسانس استفاده می‌شود: یکی برای رنگ‌آمیزی سلول‌های زنده و دیگری برای سلول‌های مرده. سلول‌های زنده و مرده به راحتی با میکروسکوپ فلورسانس قابل تمایز هستند.

هر یک از این روش‌ها مزایا و معایب خاص خود را دارند و انتخاب روش مناسب بستگی به نوع سلول‌ها، مواد مورد آزمایش و هدف تحقیق دارد.

روش‌های مختلفی برای انجام تست سمیت سلولی وجود دارد که هر کدام ویژگی‌ها و مزایای خاص خود را دارند.

جهت کسب اطلاعات بیشتر در رابطه با آزمون حساسیت زایی کلیک کنید.

آماده‌سازی سلول‌ها، انجام آزمایش و تفسیر نتایج

آماده‌سازی سلول‌ها، انجام آزمایش و تفسیر نتایج تست سمیت سلولی، فرایندی چندمرحله‌ای و دقیق است که نیاز به آشنایی با تکنیک‌های آزمایشگاهی، سلول‌شناسی و تحلیل داده‌ها دارد. در اینجا به توضیح هر کدام از مراحل آماده‌سازی سلول‌ها، اجرای آزمایش و تفسیر نتایج می‌پردازیم:

آماده‌سازی سلول‌ها

آماده‌سازی سلول‌ها یکی از مهم‌ترین مراحل تست سمیت سلولی است، زیرا کیفیت و شرایط سلول‌ها به طور مستقیم بر نتایج آزمایش تأثیر می‌گذارد.
انتخاب نوع سلول بستگی به هدف آزمایش دارد. معمولاً از سلول‌های انسانی یا حیوانی استفاده می‌شود که به انواع زیر طبقه‌بندی می‌شوند:
- سلول‌های سرطانی: برای بررسی اثرات داروهای ضدسرطان
- سلول‌های اولیه: برای ارزیابی سمیت داروها یا مواد شیمیایی
- سلول‌های بنیادی: در تحقیقات پیشرفته برای بررسی تمایز و سمیت مواد در مراحل مختلف رشد

 کشت سلول‌ها

سلول‌ها باید در شرایط ایده‌آل (دما، رطوبت، و CO₂) و در محیط کشت مناسب رشد کنند. مراحل کشت عبارت‌اند از:

تهیه محیط کشت: محیط کشت مناسب بسته به نوع سلول انتخاب می‌شود. به‌عنوان‌مثال، برای بسیاری از سلول‌های انسانی از محیط کشت DMEM یا RPMI استفاده می‌شود.

کشت سلولی و پاساژ: سلول‌ها به‌طور منظم پاساژ می‌شوند تا در شرایط بهینه باقی بمانند. پاساژ معمولاً هر 2-3 روز انجام می‌شود تا سلول‌ها از وضعیت هم‌کشت خارج شوند و به حالت فعال و رشد‌یافته بازگردند.

شمارش و تنظیم تراکم سلول‌ها: سلول‌ها با استفاده از یک شمارشگر سلولی یا میکروسکوپ شمارش می‌شوند و سپس به تراکم مناسبی برای آزمایش رقیق‌سازی می‌شوند.

  اجرای تست سمیت سلولی

برای انجام تست سمیت سلولی، مراحل زیر باید به دقت دنبال شوند:

مرحله اول: تیمار سلولی

تقسیم سلول‌ها در پلیت‌های آزمایشی: معمولاً از پلیت‌های 96 خانه‌ای استفاده می‌شود، و سلول‌ها در هر چاهک با تراکم مشخصی کشت داده می‌شوند.

اضافه کردن نمونه آزمایشی: پس از گذشت زمان مناسب و رسیدن سلول‌ها به حالت رشد پایدار، ماده یا داروی مورد نظر با غلظت‌های مختلف به هر چاهک اضافه می‌شود.

 مرحله دوم: انکوباسیون

 سلول‌ها پس از تیمار با ماده آزمایشی به مدت مشخصی (معمولاً 24 تا 72 ساعت) در دستگاه انکوباتور قرار می‌گیرند.

 دما، CO₂ و رطوبت در این مرحله باید در محدوده مطلوب تنظیم شوند. انکوباتور معمولاً روی دمای 37 درجه سانتی‌گراد و 5% CO₂ تنظیم می‌شود.

مرحله سوم: انجام تست‌های کمی

در این مرحله، بسته به نوع آزمایش، از روش‌های مختلفی برای ارزیابی سمیت سلولی استفاده می‌شود. 

 3. تفسیر نتایج تست سمیت سلولی

پس از جمع‌آوری داده‌ها از دستگاه، مرحله تحلیل نتایج آغاز می‌شود.

 1. تحلیل داده‌های جذب نوری

مقادیر جذب نوری (OD) در هر چاهک اندازه‌گیری و میانگین‌گیری می‌شود. سپس داده‌ها با استفاده از فرمول‌های ریاضی برای محاسبه درصد بقای سلول‌ها تجزیه و تحلیل می‌شوند.

درصد بقای سلولی با فرمول زیر محاسبه می‌شود:
Cell viability (%)=OD of control wellsOD of treated wells×100

 2. محاسبه IC50

مقدار IC50 نشان‌دهنده غلظتی است که در آن 50% از سلول‌ها دچار مرگ می‌شوند. برای محاسبه IC50، از نرم‌افزارهای تحلیلی مانند GraphPad Prism یا نرم‌افزارهای دیگر استفاده می‌شود.
داده‌های مربوط به درصد بقا در مقابل غلظت ماده آزمایشی رسم می‌شود و منحنی دوز-پاسخ ترسیم می‌شود. سپس نقطه‌ای که در آن 50% کاهش بقا مشاهده می‌شود، به‌عنوان IC50 مشخص می‌شود.

 3. تفسیر نتایج

مقایسه درصد بقای سلولی: درصد بقای سلول‌ها در هر غلظت به دقت بررسی می‌شود تا مشخص شود که ماده در چه غلظتی می‌تواند برای سلول‌ها سمی باشد.

آزمون‌های آماری: برای بررسی معنی‌داری تفاوت‌ها، آزمون‌های آماری مانند t-test یا ANOVA استفاده می‌شود. این آزمون‌ها کمک می‌کنند تا مشخص شود که آیا تغییرات مشاهده‌شده در بقای سلول‌ها در اثر ماده آزمایشی معنی‌دار است یا خیر.

در هر آزمایش سمیت سلولی، کنترل‌های مثبت (مانند ماده‌ای که می‌دانیم سمی است) و منفی (مانند سلول‌های بدون تیمار) برای اعتبارسنجی نتایج ضروری هستند.
 نتایج باید حداقل سه بار تکرار و استاندارد شوند تا از صحت و دقت داده‌ها اطمینان حاصل شود.
 سمیت یک ماده ممکن است بر حسب نوع سلول متفاوت باشد. بنابراین تفسیر نتایج باید با در نظر گرفتن نوع سلول، دوز و مدت زمان تیمار انجام شود.

این فرایند کمک می‌کند تا محققان با اطمینان بیشتری در مورد ایمنی و اثربخشی داروها و مواد مختلف تصمیم‌گیری کنند و همچنین امکان توسعه داروهای مؤثر و کم‌خطرتر را فراهم می‌آورد.

کاربردهای تست سمیت سلولی

تست‌های سمیت سلولی در کاربردهای متنوعی مورد استفاده قرار می‌گیرند. این تست‌ها به منظور ارزیابی ایمنی و سازگاری مواد با سلول‌ها و ارگان‌های زنده انجام می‌شوند. برخی از کاربردهای اصلی و مهم این تست‌ها عبارتند از:

  • ارزیابی ایمنی داروها و مواد شیمیایی:


در فرآیند توسعه داروها، تست‌های سمیت سلولی برای غربالگری اولیه و شناسایی دوزهای ایمن و موثر داروها مورد استفاده قرار می‌گیرند. قبل از تایید و استفاده از داروها یا مواد شیمیایی جدید در انسان، این مواد باید از نظر سمیت سلولی مورد ارزیابی قرار گیرند. این فرآیند به شناسایی و جلوگیری از اثرات مضر احتمالی کمک می‌کند و از سلامت انسان محافظت می‌کند.

  • تست تجهیزات پزشکی:


  تست‌های سمیت سلولی برای ارزیابی زیست سازگاری تجهیزات پزشکی و مواد ایمپلنت استفاده می‌شوند تا مطمئن شوند که این تجهیزات و مواد در محیط بدن عملکرد مناسبی دارند.ایمپلنت‌های پزشکی مانند پروتزها، کاتترها و استنت‌ها باید قبل از کاشت در بدن انسان، از نظر سمیت سلولی آزمایش شوند. این تست‌ها اطمینان می‌دهند که مواد ایمپلنت با سلول‌ها و بافت‌های بدن سازگاری دارند و واکنش‌های منفی ایجاد نمی‌کنند.

  • مطالعات تحقیقاتی:


 از تست‌های سمیت سلولی برای مطالعه مکانیسم‌های سمیت مواد مختلف و شناخت دقیق تاثیرات آن‌ها بر سلول‌ها استفاده می‌شود.
 این تست‌ها به محققان کمک می‌کنند تا داروها و درمان‌های جدید را شناسایی و ارزیابی کنند. با استفاده از تست‌های سمیت سلولی، می‌توان به سرعت اثرات مثبت و منفی ترکیبات جدید را تعیین کرد.

  • صنعت آرایشی و بهداشتی:


 مواد و ترکیبات استفاده شده در محصولات آرایشی و بهداشتی باید از نظر سمیت سلولی بررسی شوند تا مطمئن شوند که برای استفاده انسانی ایمن هستند.
 ترکیبات جدید قبل از ورود به بازار از نظر سمیت سلولی ارزیابی می‌شوند تا اطمینان حاصل شود که بدون خطر هستند.

   

تست‌های سمیت سلولی در کاربردهای متنوعی مورد استفاده قرار می‌گیرند.

برای آشنایی با آزمون تحریک زایی کلیک کنید.

اهمیت انجام آزمون سمیت سلولی

تست سمیت سلولی یکی از آزمایش‌های حیاتی در ارزیابی ایمنی و زیست‌سازگاری تجهیزات پزشکی است. این تست به‌منظور بررسی اثرات سمی بالقوه مواد و محصولات پزشکی بر سلول‌های بدن انجام می‌شود. در اینجا به دلایل اهمیت این تست در صنعت تجهیزات پزشکی پرداخته می‌شود:

  •  تضمین ایمنی محصولات

یکی از اهداف اصلی انجام تست سمیت سلولی، اطمینان از ایمنی محصولات پزشکی است. تجهیزات و مواد پزشکی که با بدن انسان در تماس هستند، باید بدون خطرات زیستی و شیمیایی باشند. این تست کمک می‌کند تا محصولات پیش از ورود به بازار از نظر ایمنی تایید شوند و از بروز عوارض جانبی جلوگیری شود.

  • رعایت استانداردهای بین‌المللی

تست سمیت سلولی مطابق با استانداردهای بین‌المللی مانند ISO 10993-5 انجام می‌شود. رعایت این استانداردها برای تولیدکنندگان تجهیزات پزشکی ضروری است تا بتوانند محصولات خود را در بازارهای جهانی عرضه کنند. انجام این تست‌ها نه تنها به انطباق با مقررات قانونی کمک می‌کند بلکه اعتبار و اعتماد به محصولات را نیز افزایش می‌دهد.

  • پیشگیری از عوارض جانبی

مواد سمی ممکن است باعث بروز عوارض جدی مانند آسیب‌های سلولی، التهاب، و حتی مرگ سلول‌ها شوند. تست سمیت سلولی به شناسایی و حذف مواد سمی در مراحل اولیه تولید کمک می‌کند. این اقدام از وقوع مشکلات بهداشتی برای بیماران جلوگیری کرده و از هزینه‌های درمانی و حقوقی ناشی از عوارض جانبی پیشگیری می‌کند.

  •  ارتقاء کیفیت محصولات

تست سمیت سلولی به تولیدکنندگان کمک می‌کند تا کیفیت محصولات خود را بهبود بخشند. با شناسایی و حذف مواد سمی، تولیدکنندگان می‌توانند محصولات ایمن‌تر و موثرتر ارائه دهند. این امر نه تنها به بهبود سلامت بیماران کمک می‌کند بلکه موجب افزایش رقابت‌پذیری محصولات در بازار نیز می‌شود.

  •   حمایت از تحقیقات و توسعه

تست سمیت سلولی ابزار مهمی برای تحقیقات و توسعه در صنعت تجهیزات پزشکی است. این تست به پژوهشگران امکان می‌دهد تا تاثیرات مواد جدید را بر سلول‌ها ارزیابی کرده و راه‌حل‌های نوآورانه‌ای برای بهبود ایمنی و کارایی محصولات ارائه دهند.

تست سمیت سلولی از اهمیت بالایی در تضمین ایمنی، کیفیت و کارایی تجهیزات پزشکی برخوردار است. این تست به تولیدکنندگان کمک می‌کند تا محصولات خود را مطابق با استانداردهای بین‌المللی و با اطمینان از عدم وجود مواد سمی به بازار عرضه کنند. با انجام این تست، می‌توان از بروز عوارض جانبی جلوگیری کرده و سلامت بیماران را حفظ نمود.

 

تست سمیت سلولی یکی از آزمایش‌های حیاتی در ارزیابی ایمنی و زیست‌سازگاری تجهیزات پزشکی است.

جهت کسب اطلاعات بیشتر در رابطه با آزمون زیست سازگاری کلیک کنید.

آزمایشگاه نیکوفارمد: مرجعی معتبر برای انجام تست سمیت سلولی

آزمایشگاه نیکوفارمد به عنوان یکی از بزرگترین و مجهزترین آزمایشگاه های کنترل کیفی در ایران، مفتخر است که به عنوان آزمایشگاه همکار سازمان غذا و دارو، خدمات خود را در زمینه انجام تست سمیت سلولی ارائه دهد.

با بهره مندی از مجرب ترین کارشناسان و تجهیزات پیشرفته، نیکوفارمد قادر است طیف وسیعی از تست های زیست سازگاری را با دقت  بالا انجام دهد.

آزمایشگاه نیکوفارمد به عنوان یکی از بزرگترین و مجهزترین آزمایشگاه های کنترل کیفی در ایران، مفتخر است که به عنوان آزمایشگاه همکار سازمان غذا و دارو، خدمات خود را در زمینه انجام آزمایش سمیت سلولی ارائه دهد. با بهره مندی از مجرب ترین کارشناسان و تجهیزات پیشرفته، نیکوفارمد قادر است طیف وسیعی از تست های زیست سازگاری را با دقت بالا انجام دهد.

دلایل اعتبار آزمایشگاه نیکوفارمد برای انجام آزمایش سمیت سلولی

  • سابقه و تجربه: نیکوفارمد سابقه ی درخشانی در انجام آزمایش های مختلف، از جمله آزمایش سمیت سلولی، دارد. این آزمایشگاه سال هاست که با مراکز تحقیقاتی، دانشگاه ها و شرکت های مختلف در ایران همکاری می کند و مورد تایید آنها می باشد.
  • تجهیزات پیشرفته: نیکوفارمد مجهز به جدیدترین تجهیزات و فناوری های روز دنیا برای انجام آزمایش سمیت سلولی است. این امر به این معنی است که آزمایش ها با دقت و صحت بالا انجام می شوند و نتایج قابل اعتمادی را ارائه می دهند.
  • کارشناسان مجرب: تیمی از مجرب ترین کارشناسان علوم آزمایشگاهی در نیکوفارمد مشغول به کار هستند. این کارشناسان دانش و تخصص بالایی در زمینه انجام آزمایش سمیت سلولی دارند و می توانند به بهترین نحو به شما در انجام این آزمایش کمک کنند.
  • همکاری با سازمان های معتبر: نیکوفارمد به عنوان آزمایشگاه همکار سازمان غذا و دارو، اداره کل تجهیزات و ملزومات پزشکی، سازمان ملی استاندارد (17025) و شبکه آزمایشگاهی فناوری راهبردی شناخته شده است. این امر مهر تاییدی بر کیفیت و اعتبار خدمات این آزمایشگاه می باشد.
  • محدوده ی وسیع خدمات: نیکوفارمد قادر است طیف وسیعی از آزمایش های سمیت سلولی را با توجه به نیازهای شما انجام دهد. این آزمایشگاه می تواند آزمایش های مختلفی را بر روی سلول های مختلف و با استفاده از روش های مختلف انجام دهد.
  • قیمت مناسب: نیکوفارمد خدمات خود را با قیمت های مناسب و رقابتی ارائه می دهد. این امر به شما کمک می کند تا با صرف هزینه ای معقول، از خدمات با کیفیت این آزمایشگاه بهره مند شوید.

 

آزمایشگاه نیکوفارمد به عنوان یکی از بزرگترین و مجهزترین آزمایشگاه های کنترل کیفی در ایران، مفتخر است که به عنوان آزمایشگاه همکار سازمان غذا و دارو، خدمات خود را در زمینه انجام تست سمیت سلولی ارائه دهد.

اگر به دنبال آزمایشگاه معتبر برای انجام آزمون سمیت سلولی هستید، آزمایشگاه نیکوفارمد بهترین انتخاب برای شماست.

شیوه انجام تست سمیت سلولی

 متداول ترین روش در ارزیابی سمیت سلولی، سنجش بقای سلولی به روش MTT یا (۳-(۴,۵-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) است. با گسستگی حلقه تترازولیوم MTT توسط آنزیم‌های میتوکندریایی در سلول‌های زنده، کریستال‌های فورمازان بنفش رنگ نامحلول تشکیل می‌شود. تشکیل این کریستال‌ها نشان دهنده فعال بودن آنزیم‌های زنجیره تنفسی و معیاری برای زنده بودن سلول‌ها است. با اندازه گیری میزان جذب توسط اسپکتوفتومتر در طول موج‌های مشخص می‌توان تعداد سلول‌های زنده را تعیین کرد. این آزمون بر اساس استاندارد ISO 10993-5 انجام شده و هدف آن ارزیابی برون تنی سمیت سلولی می‌باشد.

متداول ترین روش در ارزیابی سمیت سلولی، سنجش بقای سلولی به روش MTT یا (۳-(۴,۵-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) است. تصاویر مرتبط به تست سمیت سلولی اساس روش برای تست MTT سمیت سلولی اساس این روش مبتنی بر شدت رنگ تولید شده در اثر فعالیت میتوکندری سلولها می­ باشد که در طول موج ۵۴۰ تا ۶۳۰ نانومتر اندازه­ گیری می­ شود و به طور مستقیم با تعداد سلول­های زنده متناسب است به طوری که افزایش یا کاهش تعداد سلول­های زنده به صورت خطی با فعالیت میتوکندری های سلول در ارتباط است. رنگ تترازولیموم MTT در سلول­های فعال (به لحاظ متابولیکی)، إحیا می­ شود. دهیدروژنازهای میتوکندریایی در سلول­های زنده با تولید NADH و NADPH منجربه تشکیل رسوب نامحلول ارغوانی رنگ به نام فورمازان می­شوند. این رسوب می­تواند توسط ایزوپروپانول یا دی متیل سولفواکسید حل گردد. از سوی دیگر، سلول­های مرده، توانایی انجام این تبدیل را به دلیل فعال نبودن میتوکندری های خود نداشته و بنابراین سیگنالی را نشان نمی­ دهند. در این روش، تشکیل رنگ به عنوان نشانگری برای وجود سلول­های زنده مورد استفاده قرار می ­گیرد. روش انجام آزمون MTT برای تست سمیت سلولی آزمون سمیت سلولی مطابق استاندارد ISO10993-5 و به سه روش آزمون NRU، آزمون CFU و آزمون MTT و آزمون XTT انجام میگیرد. متداول ترین روش در ارزیابی سمیت سلولی، سنجش بقای سلولی به روش MTT یا (۳-(۴,۵-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) است.

در روش MTT، جهت بررسی سمیت سلولی یک فلاسک L929 کانفلوئنس را زير هود برده و در شرايط كاملاً استريل محيط رويي سلول را خالي نموده، سپس سطح سلول ها را با PBS شست و شو داده و سپس به آن تريپسين افزوده تا سلول‌ها از حالت كشيده و فيبروبلاستيك خارج شده و به شكل كروي در آيند. سپس محيط ۱۰ % FBS دار (سرم جنین گاوی) روي آنها ريخته تا تريپسين خنثي شود. پس از آن سلول ها را درون لوله فالكون ريخته با دور rpm 1200 به مدت ۵ دقيقه سانتريفوژ مي شوند كه سلول ها از محيط جدا شده و در كف فالكون قرار گيرند. سپس لوله فالكون را از سانتريفوژ خارج كرده و محيط رويي آن را دور ریخته و روي آن محيط ۱۰ % FBS دار ريخته و توسط لام نئوبار شمارش سلولی انجام می شود. به ازای هر خانه یک پلیت ۲۴ خانه ای به میزان ۱۰۴*۵ سلول در نظر گرفته می شود. نمونه های استریل نیز در شرایط استریل در مرکز هر خانه از پلیت قرار داده و سوسپانسیون سلولی به آن اضافه می شود و به مدت ۲۴ ساعت در انكوباتور C37 و Co2 5 % قرار داده می شود. طبق استاندارد ISO 10993-5 پس از ۲۴ ساعت، محیط رویی سلول را برداشته و با PBS لایه سلولی شست و شو داده می شود و سپس محلول MTT (1mg/ml) به میزان کافی روی لایه سلولی ریخته می شود. پلیت کشت به مدت ۳-۵ ساعت درون انکوباتور در تاریکی قرار می گیرد.

پس از مدت زمان گفته شده سلول ها با PBS شست و شو می شود تا MTT واکنش نکرده خارج شود. محصول فرمازان ایجاد شده توسط حلال ایزوپروپانل حل می شود و جذب هر خانه در طول موج ۵۴۰ نانومتر خوانده می شود. میزان مانایی سلول (Cell Viability) حاصل کسر جذب هر نمونه بر نمونه کنترل (ظرف پلی استایرن) است.

 محاسبه درصد سلولهای زنده در تست سمیت سلولی درصد سلول‌های زنده یا میزان بقای سلولی در بررسی سمیت سلولی، بر اساس رابطه زیر محاسبه می‌گردد: ۱۰۰ × جذب متوسط نمونه‌های کنترل / جذب متوسط نمونه‌های تیمار شده = درصد سلول‌های زنده سميت سلول (Cytotoxicity)  : عوامل شيميائی و بيولوژيکی که باعث مرگ سلول می شوند.

 متداول ترین روش در ارزیابی سمیت سلولی، سنجش بقای سلولی به روش MTT است.
شیوه انجام تست سمیت سلولی

آزمون کيفی سميت سلولی (مورفولوژی سلول):  کشت سلول و در مجاورت قراردان نمونه مورد آزمايش بصورت مستقيم در تماس فيزيکی (همکشتی) و يا با اضافه کردن عصاره بدست آمده از نمونه مورد آزمايش در محيط کشت سلول. ارزيابی آسيب سلولی در زير ميکروسکوپ معکوس. تغييرات ظاهری سلول (گرد شدن) و ساير موارد غير عادی و همچنين عدم تکثير و ازدياد سلول نشانگر آسيب سلولی است. آزمون کمی سميت سلولی (در صد زنده مانی) : کشت سلول با همان روش کيفی که اشاره شد سلول ها کشت داده می شوند در مجاورت نمونه مورد آزمايش و ارزيابی آسيب سلولی بوسيله روش کمی ازدياد سلولی با استفاده از شدت رنگ آميزی بوسيله تترا زوليوم (MTT) انجام می شود.                                                              

 yellow tetrazolium MTT (3-(4, 5-dimethylthiazolyl-2)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide علاوه بر آن روش Neutral Red Uptake (NKA) نيز  قابل اجرا است.لذا در آزمایشگاه های نیکوفارمد ، مطالعات سمیت سلولی ما بر روی فیبروبلاست و رده های سلولی مختلف در صورت درخواست مشتری توسط کارشناسان ما بر اساس نوع محصول انجام می شود. مطالعات سمیت سلولی در محدوده تجهیزات پزشکی آزمایشی است که باید روی تمام محصولاتی که نیاز به آزمایش زیست سازگاری دارند انجام شود. این یکی از آزمایش های اولیه است که در ارزیابی زیست سازگاری انجام می شود.

عملکرد آزمایش و قابلیت اطمینان نتایج آن بسیار مهم است زیرا به عنوان مرجع عمل می کند. به همین دلیل، آزمایشگاه ما، که دارای اعلامیه انطباق GLP که بعنوان یک گواهی کیفیت مهم است، این اطمینان را به مشتریان خود پيشنهاد می کند. 

بیومواد طبیعی و  یا مصنوعی موادی هستند که برای انجام و یا پشتیبانی از عملکرد بافت‌های زنده در بدن انسان استفاده می‌شوند. تلاش های فشرده ای برای توسعه مواد جدید برای این منظور در حال انجام است. بیومواد طراحی شده برای کاشت در یک سیستم زنده و به طور جزئی یا کامل بر عملکرد اندام ها و بافت ها باید از نظر بیولوژیکی سازگار، غیر سمی (غير سرطان زا، بدون سميت ژنی، بدون حساسيت زائی، بدون تحريک زائی و ....) واز نظر شیمیایی بی اثر و پایدار باشد، از استحکام مکانیکی کافی برخوردار باشد، بتواند خود را با زندگی پرمشغله وفق دهد و وزن و چگالی مناسبی داشته باشد. علاوه بر این، لازم است که خواص فیزیکی، شیمیایی، مکانیکی و حرارتی آن به خوبی شناخته شده باشد و بدون و يا کمترين عوارض جانبی. برای تمامی این ویژگی ها، باید با در نظر گرفتن ماهيت لوازم پزشکی، آزمایشاتی را که باید انجام شود، مشخص کرد. زیست سازگاری دستگاه های پزشکی توسعه یافته در این زمینه با بافت های انسانی تنها در نتیجه آزمایش های انجام شده مشخص می شود. 


ایمیل : nikopharmed[a]gmail.com تلفن تماس : 02144184570 موبایل : 09926062450

ارتباط در بستر واتساپ با نیکو فارمد
Close and go back to page
© کلیه حقوق مادی و معنوی این وب سایت نزد نیکوفارمد محفوظ می باشد . | طراحی ، توسعه و سئو 09122452209