تست تب زایی یا پیروژنیسیتی؛ آزمایش تشخیص پیروژن بخشی از آزمایشات آزادسازی اجباری برای داروهای استریل برای استفاده تزریقی است.

تا به امروز، دو روش آزمایشی که بیشتر مورد استفاده قرار می‌گیرند، آزمایش تشخیص اندوتوکسین باکتریایی و آزمایش پیروژن خرگوش هستند.

یکی دیگر از روش‌های آزمایش پیروژن، آزمایش فعال‌سازی مونوسیت (MAT)، بر استفاده از سلول‌های مونوسیت انسانی برای تقلید از پاسخ پیروژن انسانی در شرایط آزمایشگاهی متکی است.

 

برای کسب اطلاعات بیشتر و دریافت خدمات با ما تماس بگیرید.

آزمایش پیروژن گامی حیاتی در حصول اطمینان از ایمنی داروها و تجهیزات پزشکی تزریقی است. این بخشی از آزمایشات آزادسازی اجباری برای جلوگیری از واکنش های تب تهدید کننده زندگی ناشی از مواد تب زا است. سنجش فعال‌سازی مونوسیت (MAT) می‌تواند هر دو پیروژن اندوتوکسین و غیر اندوتوکسین را در یک آزمایش آزمایشگاهی شناسایی کند.

 

مکانیسم اثر پیروژن ها

پیروژن ها با فعال کردن سیستم ایمنی ذاتی، و به طور خاص با فعال کردن مونوسیت ها، واکنش تب را تحریک می کنند. این گلبول های سفید، آنتی ژن ها را از طریق گیرنده های خود به نام گیرنده های تشخیص الگو (PRR) تشخیص می دهند. فعال شدن این گیرنده ها منجر به تولید پیروژن های درون زا مانند سیتوکین ها می شود که تأثیر مستقیمی بر تنظیم دمای بدن در سطح هیپوتالاموس دارند.

 

مواد تب ‌زا که از منابع مختلف (باکتری‌ها، ویروس‌ها، مخمرها و کپک‌ها) می‌آیند، توسط نوع خاصی از PRR به نام گیرنده‌های شبه تلفات (TLR) که توسط مونوسیت‌ها بیان می‌شود، شناسایی می‌شوند. اجزای دیواره سلولی باکتری توسط TLR های سطحی شناسایی می شوند، در حالی که اسیدهای نوکلئیک توسط TLR های درون سلولی شناسایی می شوند.

 

تنوع گیرنده های TLR و همچنین ویژگی هر زیرگروه TLR برای لیگاندهای مختلف نشان می دهد که پاسخ تب مشاهده شده در انسان ممکن است نه تنها توسط لیپوپلی ساکارید (LPS)، بلکه توسط بسیاری از مواد دیگر از باکتری های گرم منفی و مثبت ایجاد شود. ویروس ها، مخمرها، کپک ها یا حتی انگل ها.

پیروژن ها به طور کلی به دو گروه طبقه بندی می شوند:

• اندوتوکسین ها (LPS از باکتری های گرم منفی)
• پیروژن هایی که ماهیت غیر اندوتوکسینی دارند (پیروژن های غیر اندوتوکسین، NEPs).

 

 تشخیص عوامل تب زا

مواد تب زا موجود در محصولات دارویی تزریقی می توانند واکنش تب شدیدی را پس از مصرف ایجاد کنند. بنابراین، آزمایش این محصولات تزریقی قبل از انتشار با تأیید عدم وجود عوامل تب‌زا برای تضمین کیفیت محصول و ایمنی بیمار الزامی است.

 

امروزه روش‌های آزمایشی متعددی برای تشخیص عوامل تب‌زا در نمونه‌های دارویی موجود است. روشی که عمدتاً مورد استفاده قرار می گیرد، آزمایش اندوتوکسین باکتریایی (BET) است، علیرغم ویژگی آن برای یک آلاینده منفرد، LPS، که از باکتری های گرم منفی منشأ می گیرد و TLR4 سلول های مونوسیت را هدف قرار می دهد.

 

برای اطمینان از تشخیص طیف گسترده ای از آلاینده های تب زا، می توان از تست پیروژن خرگوش (RPT) استفاده کرد. با این حال، استحکام پایین آن و نیاز به استفاده از حیوانات برای انجام آزمایش، معایب بدنامی را به آن می‌دهد که برخلاف دستورالعمل‌های مفهوم 3R (جایگزینی، کاهش، اصلاح/جایگزینی، کاهش، اصلاح) موجود در اروپا است.

 

تست فعال سازی مونوسیت (MAT) تا به امروز تنها روش برای ارزیابی تب زایی یک نمونه با استفاده از آزمایش آزمایشگاهی با استفاده از سلول های مونوسیت انسانی باقی مانده است.

این آزمایش واکنش ایمنی بدن انسان را بازتولید می‌کند: در حضور پیروژن‌ها، مونوسیت‌ها فعال می‌شوند و سیتوکین‌هایی مانند اینترلوکین-6 تولید می‌کنند که سپس می‌توان آن را با آزمایش الایزا اندازه‌گیری کرد.

 

برای انجام آزمایش MAT می توان از چندین منبع مونوسیت انسانی استفاده کرد:

• خون کامل،
• مونوسیت های جدا شده از خون
• حتی یک رده سلولی مونوسیت.

 

تا به امروز، تنها خط سلولی Mono-Mac-6 (MM6) برای استفاده در آزمون MAT تأیید شده است. همه این منابع مونوسیت ها در فصل 2.6.30 (MAT) فارماکوپه اروپا به عنوان منابع معتبر MAT ذکر شده اند. با این حال، استفاده از رده سلولی گاهی اوقات در مورد توانایی آن در تشخیص پیروژن های نوع غیر اندوتوکسین (NEPs) مورد تردید قرار گرفته است.

 

تست فعال سازی مونوسیت (MAT)

MAT که برای تشخیص آندوتوکسین و پیروژن های غیر اندوتوکسین در محصولات تزریقی مانند داروها یا دستگاه های پزشکی طراحی شده است، جایگزینی مطابق با مقررات در شرایط آزمایشگاهی برای آزمایش های حیوانی معمولی ارائه می دهد.

 

تست پیروژن خرگوش و تست لیمولوس آمبوسیت لیزات (LAL) اغلب برای تشخیص پیروژن استفاده می شود. هر دو روش از حیوانات استفاده می کنند و محدودیت هایی دارند. تست پیروژن خرگوش از عدم استحکام رنج می برد زیرا پاسخ حیوان می تواند به طور گسترده ای با پاسخ انسان متفاوت باشد. تست LAL فقط اندوتوکسین‌ها را شناسایی می‌کند، که یک نگرانی ایمنی ایجاد می‌کند زیرا پیروژن‌های غیر اندوتوکسینی که ممکن است در نمونه آزمایش‌شده وجود داشته باشند، شناسایی نمی‌شوند.

 

مقالات بیشتر:

تست کاشت یا ایمپلنت

تست سمیت سیستماتیک حاد

تست سمیت سیستماتیک مزمن

ولیدیشن اتاق تمیز

اثرات هم افزایی بالقوه ترکیبات پیروژن

آزمایش‌هایی که با یک آلاینده تب‌زا انجام می‌شوند می‌توانند منجر به سوگیری شوند، زیرا آلودگی‌ها در داروها یا دستگاه‌های پزشکی به ندرت از یک تب‌زا ایجاد می‌شوند. حتی زمانی که یک میکروارگانیسم واحد محصولی را آلوده می کند، چندین TLR می تواند درگیر شود و عناصر مختلف دیواره سلولی را هدف قرار دهد (مثلاً در مورد یک باکتری تاژک).

 

مزیت عمده روش MAT توانایی آن در ارزیابی پاسخ ایمنی کلی سلول های مونوسیتی است که منجر به ارزیابی کارآمد تب زایی مخلوطی از پیروژن ها در انسان می شود.

 

این پدیده هم افزایی بالقوه با افزودن مقدار کمی اندوتوکسین (محدودیت تشخیص) از آزمایش به لیگاندهای مختلفی که قبلاً آزمایش شده بودند، همچنین در مقدار کمی (محدودیت تشخیص) آنالیز شد. نتایج یک اثر هم افزایی را برای پیروژن های خاص نشان می دهد، خواه آنها توسط گیرنده های غشایی یا درون سلولی شناسایی شوند. این اثر برای imiquimod مشاهده نشد.

 

اثر هم افزایی نیز به دوز اندوتوکسین اضافه شده به NEP ها بستگی دارد. بنابراین این می تواند علت غیرخطی بودن قابل توجه در نتایج به دست آمده با رقت های متعدد از یک نمونه مشابه آلوده به چندین عامل تب زا باشد. بنابراین این امر اهمیت آزمایش، تا حد امکان، کمترین رقت (غلظت بالا) نمونه را که هیچ تداخلی با روش آزمایش وجود ندارد، تقویت می کند. این رقت باید در طول اعتبارسنجی خاص محصول تعریف شود.

 تب زایی |  آزمون تب زایی