روش‌های نگهداری صحیح میکروارگانیسم‌ها در آزمایشگاه میکروبیولوژی؛ در هر آزمایشگاه میکروبیولوژی باید میکروارگانیسم ها برای تداوم انجام آزمایشات تحت شرایط خاصی حفظ و نگهداری شوند. برای نگهداری کوتاه مدت (چند هفته) در دمای 4 درجه سانتی گراد از پلیت آگار و محیط کشت‌های شیبدار استفاده می‌شود. میکروارگانیسم‌ها برای نگهداری طولانی‌مدت (چند سال‌) در دمای ۸۰- درجه سانتی‌گراد فریز می‌شود و برای نگهداری طولانی‌تر (بیش از 5 سال) در نیتروژن مایع در دمای ۱۹۶- درجه سانتی‌گراد غوطه‌ور می‎شود. نمونه‌های ذخیره‌شده با ذوب ملایم تا دمای 37 درجه سانتی‌گراد و سپس تلقیح در محیط‌های رشد غنی، بازیابی می‌شوند. یکی از فعالیت‌های متداول در مجموعه آزمایشگاه‌های همکار نیکوفارمد آریا نگهداری صحیح میکروارگانیسم‌ها در آزمایشگاه میکروبیولوژی است.

   برای کسب اطلاعات بیشتر و دریافت خدمات با ما تماس بگیرید.

روش نگهداری صحیح می‌تواند در حفظ ویژگی‌های گونه‌های میکروبی موثر باشد. با توجه به اهمیت میکروارگانیسم‌ها در مطالعات میکروبی به‌ عنوان ارگانیسم‌های استاندارد، حفظ میکروارگانیسم‌ها نقش کلیدی در تضمین تکرارپذیری و تداوم نتایج دارد. تهیه یک بانک ذخایر میکروبی در آزمایشگاه میکروبیولوژی میکروارگانیسم‌ها را قادر می‌سازد تا به راحتی نگهداری و بازیابی شوند. در مقابل انجام کشت‌های مداوم میکروبی روی پلیت‌ها یا لوله‌های محیط کشت می‌تواند منجر به ایجاد جهش‌های ناخواسته در میکروارگانیسم‌ها شود. بنابر این بسته به مدت زمان نگهداری و نوع میکروارگانیسم، باید آن‌ها را به روش خاصی ذخیره کنید. یکی از فعالیت‌های متداول در مجموعه آزمایشگاه‌های همکار نیکوفارمد آریا نگهداری صحیح میکروارگانیسم‌ها در آزمایشگاه میکروبیولوژی است.

دلایل نگهداری میکروارگانیسم‌ها

دلیل اصلی حفظ و نگهداری میکروارگانیسم‌ها این است که تا زمانی که قرار است از آن‌ها برای آزمایش‌های خود استفاده کنیم، آن‌ها را بدون آلودگی و تغییرات ژنتیکی نگه داریم. نگهداری میکروارگانیسم‌ها به طور معمول با استفاده از دماهای پایین و تکنیک‌های خشک کردن انجمادی انجام می شود. در این روش‌ها فعالیت متابولیک سلولی بدون کشته شدن یا آسیب رساندن به سلول باکتری‌ها تقریباً به صفر می‌رسد. یکی از فعالیت‌های متداول در مجموعه آزمایشگاه‌های همکار نیکوفارمد آریا نگهداری صحیح میکروارگانیسم‌ها در آزمایشگاه میکروبیولوژی است.

ذخیره سازی کوتاه مدت میکروارگانیسم‎ها

باکتری‎ها را می توان برای دوره‌های کوتاه مدت در محیط رشد مناسب حاوی آگار رشد داد. کشت میکروارگانیسم ها در پلیت آگار برای چند هفته زمانی که در یخچال آزمایشگاهی در دمای 4 درجه سانتی‌گراد نگهداری می شوند، زنده می‎مانند. یک روش مشابه اما با طول عمر نگهداری کمی طولانی‌تر، کشت در محیط شیبدار است. به این منظور یک کلنی از پلیت آگار با ابزار استریل انتخاب شده و در سطح یک لوله محتوی محیط کشت آگار استریل قرار داده می‎شود. یکی از فعالیت‌های متداول در مجموعه آزمایشگاه‌های همکار نیکوفارمد آریا نگهداری صحیح میکروارگانیسم‌ها در آزمایشگاه میکروبیولوژی است.
اکثر میکروارگانیسم ها (باکتری ها و قارچ ها) را می توان با استفاده از این روش ذخیره کرد و معمولا بهترین راه برای ذخیره میکروارگانیسم هایی است که به طور مرتب از آن استفاده می شود. بسته به گونه و جنس میکروارگانیسم‌ها، کشت در محیط شیبدار می‌تواند از دو هفته تا یک سال طول قابل بازیافت باشد.
با استفاده از مواد مغذی محیط‌های کشت، این میکروارگانیسم‌ها به طور پیوسته رشد می کنند، البته در دماهای یخچالی آهسته تر، و این امر به آنها امکان می دهد تا با مواد مغذی موجود در محیط کشت بیشتر زنده بمانند. یکی از فعالیت‌های متداول در مجموعه آزمایشگاه‌های همکار نیکوفارمد آریا نگهداری صحیح میکروارگانیسم‌ها در آزمایشگاه میکروبیولوژی است.

کاهش آلودگی در طی حفظ و نگهداری میکروارگانیسم‌ها

برای به حداقل رساندن آلودگی و همچنین جلوگیری از خشک شدن پلیت‌ها آگار، باید آن‌ها به طور ایمن با فیلم آزمایشگاهی پیچیده شوند و به صورت وارونه (سمت آگار به سمت بالا) نگهداری شوند. همچنین لوله ها و ویال های حاوی کشت آگار باید درپوش داشته باشند. یکی از فعالیت‌های متداول در مجموعه آزمایشگاه‌های همکار نیکوفارمد آریا نگهداری صحیح میکروارگانیسم‌ها در آزمایشگاه میکروبیولوژی است.

معایب ذخیره سازی کوتاه مدت

در حالی که مزیت ذخیره سازی کوتاه مدت این است که میکروارگانیسم های شما سریع و آسان بازیابی می شوند (با رگه گذاری آنها در صفحات جدید برای رشد جدید)، آگار در مدت طولانی خشک می شود. یکی از فعالیت‌های متداول در مجموعه آزمایشگاه‌های همکار نیکوفارمد آریا نگهداری صحیح میکروارگانیسم‌ها در آزمایشگاه میکروبیولوژی است. علاوه بر این، مواد مغذی در محیط کشت توسط میکروارگانیسم ها مصرف می شوند و مواد زائد متابولیک نیز تا سطوح سمی در سطح آگار تجمع می یابند. فقدان مواد مغذی و تجمع مواد زائد سمی در نهایت باعث مرگ میکروارگانیسم های مذکور می شود. حتی به عنوان یک اتفاق نامطلوبتر، ممکن است جهش های ژنتیکی ناخواسته ای در میکروارگانیسم ها رخ دهد. نکته کلیدی این است که انتخاب این روش با توجه به بازه زمانی آزمایشات انجام شود و قبل از ذخیره میکروارگانیسم ها برای زمان استفاده از آن‎ها برنامه ریزی نمود. یکی از فعالیت‌های متداول در مجموعه آزمایشگاه‌های همکار نیکوفارمد آریا نگهداری صحیح میکروارگانیسم‌ها در آزمایشگاه میکروبیولوژی است.

بیشتر بدانید:

آزمون باقیمانده گاز اتیلن اکساید

آزمایشگاه زیست سازگاری

آزمون جذب اتمی

ذخیره سازی طولانی مدت

برای نگهداری طولانی‌مدت، میکروارگانیسم‌ها باید در دمای کمتر از 20- یا کمتر 80- درجه سانتی‌گراد نگهداری شوند. به این منظور می‌توان میکروارگانیسم‎های مربوطه را مستقیماً در فریزر قرار داد یا با استفاده از نیتروژن مایع آن‌ها را به سرعت منجمد نمود. انجماد برای نگهداری بسیاری از باکتری ها، جلبک ها، قارچ ها، ویروس ها و تک یاخته ها روش مناسبی است. دمای بسیار پایین به شدت فعالیت آنزیمی و در نتیجه فرآیندهای متابولیک میکروارگانیسم ها را کاهش می دهد. یکی از فعالیت‌های متداول در مجموعه آزمایشگاه‌های همکار نیکوفارمد آریا نگهداری صحیح میکروارگانیسم‌ها در آزمایشگاه میکروبیولوژی است.
آب در هنگام یخ زدن منبسط می‌شود. به همین دلیل برای جلوگیری از آسیب رساندن و کشتن سلول‌ها از طریق تشکیل کریستال یخ، سلول‌ها را قبل از انجماد به محیط‌های رشد حاوی محافظت‌کننده‌هایی مانند 30 درصد حجمی/ حجمی گلیسرول منتقل می‌شوند. برای به حداکثر رساندن سرعت بازیابی، توصیه می‌شود که کشت‌ها در فاز تثبیت رشد میکروبی، زمانی که غلظت سلولی به بالاترین میزان خود رسیده، منجمد شوند. یکی از فعالیت‌های متداول در مجموعه آزمایشگاه‌های همکار نیکوفارمد آریا نگهداری صحیح میکروارگانیسم‌ها در آزمایشگاه میکروبیولوژی است.
کشت هایی که در دمای 20- درجه سانتی گراد نگهداری می شوند حداکثر برای یک سال پایدار هستند، در حالی که کشت هایی که در دمای 80- درجه سانتی گراد یا در نیتروژن مایع نگهداری می شوند می توانند برای چندین سال پایدار باشند. میکروارگانیسم های منجمد شده را می توان با ذوب ملایم آنها در دمای اتاق و تلقیح سلول ها در محیط رشد تازه بازیابی کرد. یکی از فعالیت‌های متداول در مجموعه آزمایشگاه‌های همکار نیکوفارمد آریا نگهداری صحیح میکروارگانیسم‌ها در آزمایشگاه میکروبیولوژی است.

فریز-درای کردن

فریز- درای کردن (لیوفیلیزاسیون) رطوبت نمونه های میکروبی را از طریق تصعید در خلاء حذف می کند، بنابراین فرآیندهای متابولیک میکروبی را متوقف می کند و برای تسهیل در ذخیره سازی و جابجایی، سلول ها را به ذرات بدون آب تبدیل می کند. در این روش نمونه های میکروبی ابتدا فریز شده و سپس در یک محفظه خلاء که به یک واحد کنترل متصل است، قرار داده میشوند. واحد کنترل به یک پمپ خلاء متصل می شود. در دماهای پایین تحت یک خلاء قوی، یخ مستقیماً به بخار آب تبدیل می شود و نمونه را خشک می کند. یکی از فعالیت‌های متداول در مجموعه آزمایشگاه‌های همکار نیکوفارمد آریا نگهداری صحیح میکروارگانیسم‌ها در آزمایشگاه میکروبیولوژی است.
روش فریز – درای کردن می‌تواند برای ذخیره باکتری ها، جلبک ها، مخمرها، ویروس ها و قارچ های هاگ زا استفاده شود. با این حال، توجه داشته باشید که لیوفیلیزاسیون برای برخی باکتری‌ها و قارچ‌های غیر اسپورساز نامناسب است، زیرا ممکن است این میکروارگانیسم‌ها نتوانند از تنش‌های کم‌آبی جان سالم به در ببرند. مناسب بودن روش فریز- درای کردن نیز به این بستگی دارد که پس از بازیابی، میکروارگانیسم‌ها برای چه منظور مورد استفاده قرار می‎گیرند. کشت‌های لیوفیلیزه شده را می‌توان با آبرسانی مجدد ذرات سلولی را در محیط‌های رشد (باکتری‌ها و جلبک‌ها)، محیط رشد حاوی میزبان‌های باکتریایی (باکتریوفاژها) یا آب (قارچ‌ها و مخمرها) قبل از تلقیح در محیط‌های کشت تازه بازیابی کرد. یکی از فعالیت‌های متداول در مجموعه آزمایشگاه‌های همکار نیکوفارمد آریا نگهداری صحیح میکروارگانیسم‌ها در آزمایشگاه میکروبیولوژی است.

میکرو کپسوله سازی

در میکرو کپسوله‌سازی، سلول‌ها قبل از ذخیره‌سازی در ماتریکسی از مواد محافظ حبس می‌شوند. این روش به عنوان یک روش نگهداری طولانی مدت میکروبی پیشنهاد شده است که میکروارگانیسم ها را در معرض تنش های شدید انجماد و خشک شدن قرار نمی دهد. مواد محافظ ماتریس های میکروکپسوله سازی عبارتند از ژلاتین، اتیل سلولز و پلی وینیل الکل (PVA). ماتریس از سلول ها محافظت می کند و ثبات ارگانیسم را در طول ذخیره سازی افزایش می دهد. با توجه به مزایای این روش برای زنده ماندن سلولی، نشان داده شده است که میکرو کپسوله کردن باکتری های پروبیوتیک در آلژینات کلسیم باعث بهبود زنده ماندن آن‎ها در دمای 80- درجه سانتیگراد می شود. یکی از فعالیت‌های متداول در مجموعه آزمایشگاه‌های همکار نیکوفارمد آریا نگهداری صحیح میکروارگانیسم‌ها در آزمایشگاه میکروبیولوژی است.

سایر تکنیک های نگهداری میکروبی

روش‌های الکتروریسی و الکترواسپری، که در آن میکروارگانیسم‌ها به ترتیب در نانوالیاف و قطرات مایع به دام افتاده‌اند، نیز برای حفظ حیات باکتری‌های حساس پروبیوتیک استفاده شده‌اند. حفظ میکروارگانیسم ها به روش صحیح تضمین می کند که آن‎ها در بهترین شرایط بوده و در نتیجه در زمان، تلاش و هزینه آزمایشگاه صرفه‎جویی می شود. رشد کوتاه مدت میکروبیولوژیست را قادر می سازد فوراً سلول های خود را بازیابی کند، در حالی که انجماد طولانی مدت می‌تواند سلول ها را برای سال ها زنده نگه دارد. یکی از فعالیت‌های متداول در مجموعه آزمایشگاه‌های همکار نیکوفارمد آریا نگهداری صحیح میکروارگانیسم‌ها در آزمایشگاه میکروبیولوژی است.