صحه گذاری بایوبردن

آزمون بایوبردن

 

آزمون بایوبردن بر اساس استاندارد  ISO 11737-1  انجام شده و هدف از آزمون بایوبردن، برآورد جمعيت ميكروارگانيسم‌هاي زنده در داروها، مکمل‌ها، تجهيزات و ملزومات پزشكي، اجزاي آن، مواد اوليه يا مواد بسته بندي می‌باشد. اين برآورد شامل شمارش و تعيين مشخصات جمعيت ميكروبي مي‌باشد.

تست بایوبردن

 

روش انجام آزمون بایوبردن

 

انتخاب روش انجام تست بایوبردن بر اساس درخت انتخاب روش بایوبردن انجام می‌گیرد

 

تست آزمون بایوبردن

پس از شمارش کلنی‎‌ها در تست بایوبردن، در صورتی که وجود اندوتوکسین در محصول مهم باشد، باید وجود یا عدم وجود باکتری‌های گرم منفی به اثبات برسد. برای این منظور از رنگ‌آمیزی گرم استفاده می‌شود.

یکی از مهم‌ترین و متداولترین روش‌های رنگ‌آمیزی در میکروبیولوژی است که نخستین بار توسط باکتری‌شناس دانمارکی هانس کریستین گرم ابداع شد. دراین رنگ‌آمیزی، باکتری‌ها بر مبنای رنگ باکتری؛ پس از رنگ‌آمیزی، به دو دسته گرم مثبت و گرم منفی تقسیم می‌شوند.

رنگ باکتری پس از رنگ‌آمیزی به توانایی باکتری در حفظ رنگ اول؛ و به عبارتی به ساختمان دیواره سلولی آن باکتری بستگی دارد. در رنگ‌آمیزی گرم باکتری‌های گرم مثبت پس از رنگ‌آمیزی به رنگ بنفش و باکتری‌های گرم منفی به رنگ قرمز مشاهده می‌شوند.

مقاله مرتبط: آزمون استریلیتی

 

هر دو گروه یعنی باکتریهای گرم مثبت و گرم منفی هردو دارای دیواره یاخته هستند ولی فرق بین این دو گروه مربوط به ویژگی‌هایی است که در ساختمان دیواره سلولی آن‌ها وجود دارد. اساس ساختمان در دیواره سلولی باکتری‌های گرم مثبت لایه ضخیمی (۵۰ تا ۹۰ ٪ دیواره) از پپتیدوگلیکان، (به صورت مش) است، ولی در باکتری‌های گرم منفی ضخامت آن به حداقل، (۱۰٪ دیواره) می‌رسد. رنگ‌آمیزی گرم معمولاً نخستین گام در تشخیص مقدماتی ارگانیسم باکتریایی است. اگرچه رنگ‌آمیزی گرم شیوه ارزشمندی در شناسایی باکتری‌ها هم در عرصه باکتری و هم در عرصه تحقیقاتی می‌باشد اما همه باکتری‌ها با این روش قابل رده بندی نیستند.

 

روش رنگ‌آمیزی گرم

 

در آزمون بایوبردن پیش از آغاز رنگ‌آمیزی نخست باید یک فروتی از محیط کشت خالص باکتری بر روی لام تهیه کنیم، در ادامه مراحل رنگ‌آمیزی گرم به قرار زیر هستند:

نخست رنگ کریستال ویوله (با فرمول C25N3H30Cl) را به مدت ۳۰ تا ۴۵ ثانیه بر روی فروتی باکتری روی لام می‌ریزیم، در نتیجه همه باکتری‌ها به رنگ بنفش درخواهند آمد. پس از شستشوی فروتی با آب، رنگ کریستال ویوله را با افزودن لوگول (خنثی نمودن PH) به مدّت ۳۰ تا ۴۵ ثانیه تثبیت می‌کنیم. لوگو با کریستال ویوله ترکیب شده و ایجاد کمپلکس‌هایی می‌کند که باعث تثبیت رنگ کریستال ویوله درداخل دیواره سلولی باکتری می‌شود. پس از این مرحله، همه باکتری‌ها هم‌چنان به رنگ بنفش مشاهده می‌شوند.

مرحله رنگ زدایی

این مهم‌ترین مرحله رنگ‌آمیزی است. دراین مرحله پس از شستشوی لام با آب، لام به مدت ۱۵ تا۲۰ ثانیه در معرض موادرنگ زدا مانند الکل استون قرار می‌گیرد سپس با آب مورد شستشو قرار می‌گیرد. در باکتری‌های گرم منفی که دارای لایه‌های پپتیدوگلیکان محدود و غشای خارجی غنی از چربی هستند این حلال باعث حذف این لایه‌ها و غشا می‌گردد و باکتری رنگ مراحل قبل را از دست می‌دهد؛ ولی در باکتری‌های گرم مثبت به علت ضخامت زیاد لایه پپتیدوگلیکانی و عدم وجود لیپید فراوان در غشا رنگ مرحلهٔ قبل از غشا خارج نمی‌شود.

در نتیجه پس از این مرحله باکتری‌های گرم منفی بی‌رنگ ولی باکتری‌های گرم مثبت همچنان بنفش باقی خواهند ماند. در انتها سطح فروتی را با سافرانین (با فرمولC20H19N4Cl) یا فوشین (قرمز رنگ) به مدت ۳۰ تا ۴۵ ثانیه پوشانده و سپس باآب شستشو داده و پس از خشک شدن با میکروسکوپ مورد بررسی قرار می‌گیرد. دراین مرحله باکتری‌های بی‌رنگ (باکتری‌های گرم منفی) به رنگ قرمز یا صورتی در می‌آیند و باکتری‌های بنفش یا آبی (باکتری‌های گرم مثبت) بدون تغییر رنگ باقی می‌مانند.

 

انجام تست های تخصصی میکروبی، حیوانی، محصولات و … در آزمایشگاه تخصصی نیکوفارمد

تست حساسیت زایی

تست تحریک زایی

تست پایداری

تست سمیت سیستماتیک

0 پاسخ

پاسخ دهید

میخواهید به بحث بپیوندید؟
مشارکت رایگان.

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *