تست تشخیص مایکوپلاسما به روش PCR؛ آلودگی مایکوپلاسما به دلیل تأثیر آن بر خواص سلولی و ایمنی محصولات بیولوژیکی یک مشکل جدی برای آزمایشگاه ها است. آلودگی‌های مایکوپلاسما در کشت‌های سلولی مورد توجه قرار نمی‌گیرد (هم از نظر ماکروسکوپی و هم از نظر میکروسکوپی)، که انجام آزمایش‌های معمول را برای تشخیص مطمئن مایکوپلاسما ضروری می‌سازد. آنها به دلیل تأثیر آنها بر خواص سلول ها و ایمنی محصولات بیولوژیکی، نگرانی جدی برای آزمایشگاه های دانشگاهی و بیودارویی هستند.

 

برای کسب اطلاعات بیشتر و دریافت خدمات با ما تماس بگیرید.

مایکوپلاسما چیست؟

مایکوپلاسماها (اصطلاحی که اغلب به جای مولکوت ها که شامل مایکوپلاسماها، آکولپلاسماها و اسپیروپلاسماها هستند استفاده می شود) در همه جا در محیط وجود دارد. در آزمایشگاه های کشت سلولی، 95 درصد از کل عفونت های مایکوپلاسما در رده های سلولی پیوسته تنها توسط شش گونه از آلاینده های گاو، خوک و منشاء انسانی ایجاد می شود. این عوامل میکروبی به راحتی از یک دسته از کشت سلولی آلوده به دسته دیگر توسط انتقال آئروسل یا با تکنیک های نامناسب آسپتیک پخش می شوند.

 

آزمایش و کنترل منظم مایکوپلاسما

آزمایش و کنترل منظم مایکوپلاسما از پیامدهای پرهزینه آلودگی کشت سلولی جلوگیری می کند و از بیودارویی ایمن و نتایج علمی قابل اطمینان اطمینان می دهد. بنابراین، اکثر ناشران علمی ارائه مطالعات سلولی را بدون شواهدی مبنی بر انجام آزمایش مایکوپلاسما نمی‌پذیرند.

در مقایسه با سایر روش‌ها، کیت‌های تشخیص مایکوپلاسما PCR سریع، ساده هستند و نیازی به مایکوپلاسماهای قابل دوام، تجهیزات ویژه یا آموزش گسترده کارکنان ندارند.

 

تشخیص مایکوپلاسما توسط

 تشخیص مایکوپلاسما توسط PCR: چالش‌های راه‌اندازی این آزمایش و جایگزینی روش کشت تنظیمی که در فارماکوپه‌های مختلف (USP، EP، JP و غیره) توضیح داده شده است.

 

آلودگی کشت های سلولی توسط مایکوپلاسماها یک خطر بزرگ برای صنعت بیوداروسازی است. به دلیل تنوع، اندازه کوچک و عدم وجود دیواره باکتریایی، این میکروارگانیسم ها با میکروسکوپ قابل تشخیص نیستند، از بین بردن آنها بسیار دشوار است و می توانند کیفیت داروها را به خطر بیندازند.

 

بنابراین تشخیص آلودگی مایکوپلاسما در مراحل مختلف تولید محصولات بیوتکنولوژیکی حیاتی است. اخیراً، استفاده از تکنیک‌های مختلف تقویت اسید نوکلئیک و به‌ویژه PCR کمی در زمان واقعی برای تشخیص مایکوپلاسما در گزارش‌های مختلف از فارماکوپه‌های اروپایی، آمریکایی و ژاپنی توصیف شده است. این گزارش‌ها استفاده از این روش‌ها را به‌عنوان جایگزین روش‌های مرسوم به شرط اعتبارسنجی مناسب تأیید کرده‌اند.

 

PCR چیست؟

PCR یک روش مستقیم، حساس و سریع است که در طول روز نتیجه می دهد. در مقایسه، روش استاندارد تنظیمی (روش مستقیم با کشت بر روی محیط های براث و آگار در شرایط مختلف) به یک دوره 28 روزه نیاز دارد.

برای استفاده از این تکنیک بسیار سریع به طور معمول، فارماکوپه نیاز به انجام یک مطالعه اعتبار سنجی دقیق برای نشان دادن هم ارزی با روش نظارتی دارد. طراحی این صلاحیت بر اساس سه معیار است: حد تشخیص ، ویژگی و استحکام.

روش غیرمستقیم با برچسب زدن فلورسنت (نوع هوخست) پس از مرحله کشت نمونه بر روی سلول های شاخص  شناسایی مایکوپلاسماهایی را که نمی توان با روش باکتریولوژیک کشت کرد ممکن می سازد. همچنین بر خلاف PCR که DNA مایکوپلاسماهای مرده و زنده موجود در یک نمونه را به طور بی رویه تکثیر می کند، برجسته کردن مایکوپلاسماهای زنده را ممکن می کند.

 

مایکوپلاسما در بیوتکنولوژی

امروزه سلول ها به ابزار ضروری برای تولید تعداد فزاینده ای از محصولات زیست درمانی تبدیل شده اند: پروتئین های نوترکیب، آنتی بادی های مونوکلونال، واکسن ها و همچنین درمان های ژنی و سلولی. در عین حال، آزمایشات سلولی از توسعه و بازاریابی این محصولات پشتیبانی می کند.

آلودگی مایکوپلاسما که عموماً قابل مشاهده نیست می تواند به طور بالقوه باعث اختلالات زیادی در فیزیولوژی سلولی (نرخ رشد، بازده تولید و غیره) در طیف وسیعی از سلول های میزبان شود: انسان و حیوان (از جمله پرندگان، پستانداران و سایر گونه های بالقوه: حشرات، گیاهان). علاوه بر این، برخی از گونه های مایکوپلاسما برای انسان بیماری زا هستند.

آزمایش تنظیمی که در فارماکوپه های اصلی به آن اشاره شده است، روشی برای تشخیص مستقیم مایکوپلاسما با کشت به مدت 28 روز در محیط های خاص (براث و آگار) است. این تأخیر طولانی در ارائه نتایج، برای محصولات زیست درمانی با طول عمر کوتاه، مانند سلول درمانی، مشکل ایجاد می کند. این همچنین مشکل دیگری ایجاد می کند زیرا برخی از گونه های مایکوپلاسما در این محیط های خاص بسیار ضعیف رشد می کنند یا اصلاً رشد نمی کنند.

در طول مراحل متوالی تولید، یک کنترل "در فرآیند" برای تشخیص مایکوپلاسما توسط PCR این امکان را فراهم می کند تا خطرات انتشار آلودگی را به مراحل زیر محدود کرده و یک تصمیم سریع و مطمئن را اتخاذ کنید. بدون رفتن») برای بقیه مراحل.

 

مقالات بیشتر:

تست  چسبندگی سلولی

تست  سمیت چشمی

تست  سمیت سلولی به روش MTT

تست  خون سازگاری و هولیز کنندگی

علاوه بر این، اگر علت اصلی به سرعت شناسایی نشود، آلودگی به طور بالقوه می تواند عواقب جدی برای آزمایشگاه یا واحد تولید داشته باشد.

 

این روش کشت 28 روزه ممکن است برای نمونه‌های سیتوتوکسیک یا برای نمونه‌های "در حال فرآیند" که نیاز به گزارش سریع و مطمئن نتایج دارند نامناسب باشد. تا حدودی به همین دلایل است که برخی از مقامات نظارتی استفاده از تست تشخیص کمی PCR را به‌عنوان یک جایگزین بر اساس مورد به مورد می‌پذیرند. این پذیرش مستلزم یک اعتبارسنجی کامل و مستند بر اساس دستورالعمل های خاص است.

 

آزمایش‌های مایکوپلاسماچک با استفاده از روش PCR که توسط ارائه‌دهنده خدمات ایجاد شده و تشخیص طیف بسیار وسیعی از سویه‌های مایکوپلاسما را تأیید می‌کند، انجام می‌شود.

 

انتخاب قرارداد فرعی با این شرکت با توجه به سرعت ارسال گزارش نتایج و گواهی‌های تجزیه و تحلیل صادر شده توسط یک مرجع معتبر در قالب مورد نیاز مجلات علمی خاص هنگام ارسال موارد تأیید شد.

 

کاربرانی که مایل به استفاده از این سرویس هستند، باید نمونه‌های خود را قبل از ارسال به سرویس آماده‌سازی راه‌حل که مسئول جداسازی رسانه، ارسال نمونه‌ها به ارائه‌دهنده خدمات و بایگانی نمونه‌های تکراری در دمای -20 درجه سانتی‌گراد در صورت تجزیه و تحلیل‌های اضافی است، به‌اندازه کافی آماده کنند. لازم را اثبات کند.

 

توجه: از کاربرانی که برای اولین بار از سرویس آنالیز مایکوپلاسما استفاده می‌کنند، درخواست می‌شود با خدمات آماده‌سازی محلول تماس بگیرند تا پروفایل کاربری در فرم سفارش برای آنها ایجاد شود.